Cooling and Cryopreservation of Equine Platelet-Rich Plasma With Dimethyl Sulfoxide and Trehalose.

Equine platelet-rich plasma (PRP) has been used in horses to repair bone, articular and tendinous lesions, laminitis, and even endometritis. However, platelets have a very limited lifespan, which makes it difficult to prepare and use PRP, except in loco. With the aim to produce PRP with higher platelet viability for clinical purposes, the effects of the cryoprotectants dimethyl sulfoxide (DMSO) and trehalose were evaluated on cooled (4°C) and cryopreserved (-196°C) equine PRP. The protocols of cooling and cryopreservation were performed independently, comparing the following treatments: fresh PRP, PRP + 6% DMSO, PRP + 300 mM of trehalose, and PRP only. The PRP samples were prepared by double centrifugation of the blood of six ponies, further divided into four aliquots. The cooled or cryopreserved aliquots were stored for 14 days. All samples were evaluated for the platelet count, the mean platelet volume, and the release of transforming growth factor beta 1 (TGF-ß1). The number of platelets in the fresh PRP and cooled samples was similar; however, platelet count was higher in the fresh PRP than in cryopreserved samples. The release of TGF-ß1 was higher in the fresh PRP (105891 ± 52398 pg/mL), but the stored samples still released significant amounts of this growth factor (27291 ± 9625 pg/mL).

Impact of spontaneous Neospora caninum infection on pregnancy loss and subsequent pregnancy in grazing lactating dairy cows.

The impact of spontaneous Neospora caninum infection on pregnancy loss and subsequent pregnancy in grazing lactating dairy cows was evaluated. Data from 1273 females (878 multiparous and 395 first-calving cows) from six preselected dairy herds were analyzed. Cows were classified as seropositive (SP) (prevalence, 24%; range, 11%-33%) or seronegative (SN) by indirect immunofluorescence detection of antibodies against N caninum. Seropositive cows (prevalence, 40.0%) presented higher (P < 0.001) incidence of abortion compared with SN cows (prevalence, 4.1%). Neospora caninum DNA was detected by real-time polymerase chain reaction in 44.4% of intact aborted fetuses from SP cows, whereas none was found in those aborted from SN cows. The average daily milk production adjusted to 305 days was lower (P < 0.001) in SP (22.5 ± 0.3 L/day) than in SN cows (24.8 ± 0.2 L/day). Furthermore, SP cows presented greater occurrence of retained placenta (17.1% vs. 6.0%; P < 0.001) and acute postpartum metritis (9.8% vs. 2.4%; P < 0.001). Despite similar pregnancy rates after first postpartum artificial insemination (27.6% vs. 31.8%; P = 0.40), cumulative pregnancy rates during 300 days in milk (94.7% vs. 98.5%; P = 0.005) were greater in SN cows. A reduced (P = 0.0001) Cox proportional hazard of pregnancy rate at 300 days in milk and a longer interval from parturition or abortion to conception (median, 111 vs. 101 days) were observed in SP compared with SN cows. Spontaneous N caninum infection is a significant contributing factor of pregnancy loss and occurrence of uterine disease (i.e., retained placenta and metritis), negatively affecting subsequent pregnancy in grazing lactating dairy cows.

Indução da ovulação com gonadotrofina coriônica humana em éguas Crioulas / Ovulation induction with human chorionic gonadotropin in criollo mares

The effect of age, follicular diameter and month of the breeding season (September to January) on the hCG induction of ovulation was evaluated using 123 Criollo mares. Age varied between two and 24 years and the animals were examined daily by rectal palpation and ultrasonography with a 5 MHz linear transducer. When ovarian follicles reached a diameter of 30 to 35 mm, ovulation was induced with an i.v. injection of 1000 IU (n = 39); 1500 IU (n = 41) or 2000 IU (n = 43) of hCG. The mares were bred the next day and examined daily until ovulation was detected. The percentage of mares ovulating before 24 h of hCG injection was 10.3%, 7.3% and 4.7%; until 48 h after injection 92.3%, 85.3% and 86.0% of the mares treated with 1000, 1500 and 2000 IU of hCG, respectively, ovulated. The month of the breeding season, age of the mares and follicular diameter had no influence on ovulatory response. The three hCG doses used in Criollo mares (P > 0.05) result in the induction of ovulation within 48 h after injection when a pre-ovulatory follicle with a 30 to 35 mm diameter was identified. A single dose of 1000 IU of hCG is efficient to induce ovulation in Criollo mares.

O efeito da idade, diâmetro folicular e mês da estação de monta (setembro a janeiro) na indução da ovulação com hCG foi avaliado em 123 éguas Crioulas. A idade das éguas variou entre dois e 24 anos e os animais foram examinados diariamente por palpação retal e ultrassonografia com transdutor linear de 5 MHz. Quando os folículos ovarianos atingiram diâmetro de 30 a 35 milímetros aplicou-se uma injeção intravenosa com 1000 UI (n = 39); 1500 UI (n = 41) ou 2000 UI (n = 43) de hCG. As éguas foram cobertas no dia seguinte e examinadas diariamente até a detecção da ovulação. O percentual de éguas que ovularam antes de 24 h da injeção de hCG foi de 10,3%, 7,3% e 4,7%, até 48h após a injeção foi de 92,3%, 85,3% e 86,0%, nos grupos com 1000, 1500 e 2000 UI de hCG, respectivamente. O mês da estação de monta, a idade das éguas ou o diâmetro folicular não influenciaram a resposta ovulatória. As três doses de hCG utilizadas em éguas Crioulas (P > 0,05) resultaram na indução da ovulação dentro de 48h após a aplicação, quando foi identificado um folículo pré-ovulatório de 30 a 35 mm de diâmetro. Uma única dose de 1000 UI de hCG é eficiente para induzir a ovulação em éguas Crioulas.

Cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro: efeito do número de embriões e da proporção de meio / Culture of in vitro produced bovine embryos: effect of number of embryos and medium ratio

Na última década, os produtores de leite e carne bovina incrementaram consideravelmente o uso da aspiração folicular (OPU) associada à produção in vitro de embriões (IVP). Oócitos recuperados pela OPU têm qualidade diversificada e seu número reduzido requer condições diferenciadas de cultivo para a IVP Para determinar o efeito do número de embriões e volume de meio sobre a IVP, 1428 embriões bovinos foram cultivados em grupos de 5, 10 e 20, em 1:1, 1:5 e 1:10mL de meio, Grupos de 20 oócitos foram maturados in vitro em 200mL de TCM-199+ rFSHh+ 10% de soro de vaca em estro (SVE), por 24h. A fecundação in vitro foi em grupos de 20 oócitos / 200mL de meio Fert-Talp, por 18h com 1x10 elevado a 6ª espermatozóides/mL. O cultivo foi em SOFaaci+5% SVE por 8 dias. Considerando-se o dia da fecundação como D0, conduziu-se as avaliações no D2 (clivagem), D7 (blastocistos) e no D9 (eclosão). A taxa de clivagem foi superior quando o cultivo foi com 20 embriões e não foi afetada quando a proporção de meio variou (1:1; 1:5 e 1:10). Com as proporções de meio de cultivo 1:5 ou 1:10, a taxa de embriões em D7 foi superior (P<0.05) à 1:1. O número de embriões cultivados influenciou a produção de blastocistos em D7 (P<0,05) com 20 embriões/gota, Estes resultados também se refletem nos percentuais de blastocistos eclodidos em D9, sendo que 1:5 e 1:10 foram superiores (P<0,05) à 1:1. Da mesma forma, a taxa de eclosão foi superior (P<0,05) com o cultivo de 10 ou 20 embriões/gota quando comparado ao grupo de 5 embriões/gota. A redução do número de embriões e da proporção de volume de meio no cultivo, afeta os índices de desenvolvimento na produção in vitro de embriões bovinos.

In the last decade the dairy and beef bovine farms had an increment in their breeding programs that inc1ude the use o ovum pick-up and in vitro production (OPU /IVP). Oocytes retrieved by OPU vary in quality and its reduced number requires appropriated culture conditions for IVP. To evaluate the effect of the number of embryos and volume of the media in the in vitro culture of bovine embryos, 1428 zygotes were culturedingroups of 5, 10 or 20 in 1, 5 or 10mLof medium. Groups of 20 oocytes matured in vitro in 200mL of TCM+rFSHh+ 10% estrus cow serum (ECS). The fertilization was performed in groups of 20 oocytes/200mL of Fert-Talp medium, for 18h with 1x10 6ª spermatozoa/mL. The culture was done in SOFaaci+5% ECS for 8 days. Considering D0 as the fertilization day, the IVP was evaluated on day 2 (cleavage), day 7 (blastocyst) and in day 9 (hatching rates). The cleavage rates were higherwhen embryos were cultured in groups of twenty. However, it was not affected by the medium ratio of 1:1,1:5 and 1:10. The use of 1:5 and 1:10mL of culture medium ratio showed higher embryo production rates in D7 (P<0.05) than 1:1 mL proporcion. The culture of 20 embryos per drop affected the blastocyst production on day 7. Likewise the hatching rates in D9 were higher with 1:5 and 1:10 than 1:1. Similarly, the hatching rates were higher in cultured of 10 or 20 embryos/drop when compared to groups of 5 embryos/ drop. The reduction of embryos and the proportion of the medium volume in culture affects the development indexes on bovine embryos in vitro production.

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua ou de vaca em estro com ou sem a adição de LH/FSH / In vitro production of bovine embryos with oestrus mare's serum or oestrus cow serum with or without LH/FSH

Mil duzentos e setenta e um oócitos foram divididos em 4 tratamentos com a finalidade de se avaliar a influência da adição de LH e FSH na produção in vitro de embriões bovinos com soro de vaca em estro (SVE) ou soro de éguas obtido no 1º dia do estro (SE). Independente do tratamento os oócitos foram maturados com TCM199 + 5,95mg/ml de Hepes, 0,025mg/ml de piruvato de sódio e 2,2mg/ml de bicarbonato de sódio, sendo adicionado 10 por cento de soro de égua (ES), 10 por cento de SVE (VS), 10 por cento de soro de égua + 0,5mg/ml de hormônio luteinizante bovino (LHb) + 0,01UI/ml de hormônio folículo estimulante recombinante humano-rFSHh (EH) e 10 por cento SVE + LHb + rFSHh (VH). Os oócitos assim tratados, foram maturados em estufa com 5 por cento de CO2 a 39ºC sob umidade saturada por 22-24h. Depois, foram fecundados em TALP-FERT por 18-20h e cultivados por 8 dias em meio SOF + 5 por cento de SE (ES e EH) ou SVE (VS e VH). As taxas de clivagem de 72 por cento obtidas no grupo VH (229/316) e 61 por cento no grupo VS (193/315) foram significativamente menores (p<0,05) que as dos grupos ES (80 por cento - 254/317) e EH (80 por cento - 257/323). A produção de embriões (blastocistos iniciais, blastocistos, blastocistos expandidos e eclodidos) no D7 após a inseminação para os grupos ES (32 por cento), EH (28 por cento) e VH (27 por cento), foi significativamente superior aos 20 por cento obtidos no VS (p<0,05). No D9, verificou-se uma diferença significativa (p<0,05) entre os grupos ES (31 por cento) e EH (29 por cento) quando comparados com o grupo VS (22 por cento), mas não houve diferença quando comparamos com o VH (24 por cento). A taxa de eclosão em D9 foi de 11 por cento (ES), 11 por cento (EH), 10 por cento (VS) e 5 por cento (VH). Não houve diferença entre as médias do número de células dos embriões (Blastocistos expandidos e eclodidos) obtidos no D9. Conclui-se, com estes resultados que, para a obtenção de taxas regulares de blastocistos, não seja necessária a adição de hormônios quando se utilize o soro de égua, e que os hormônios devam ser adicionados quando se utilize soro de vaca.

Transporte de oócitos bovinos em meio de maturaçäo sem controle de atmosfera gasosa / Transport of bovine oocytes in maturation medium without a controlled gaseous atmosphere

Oócitos (n=1177) bovinos obtidos da aspiraçäo de folículos com diâmetro entre 2 e 8mm, de ovários de matadouro foram divididos aleatoriamente em quatro tratamentos com 11 repetiçöes. Os oócitos foram maturados por 24h em TCM-199 Sais de Earle, acrescido de 25mM de bicarbonato de sódio, 25mM de HEPES, rFHS-h, Soro de Vaca em Estro (SVE) e piruvato, em estufa a 39ºC, com 5 por cento de CO2 em ar e umidade saturada (Grupo Controle, n=296) ou, submetidos ao transporte simulado por 6 (T6, n=286), 12 (T12, n=294) ou 18h (T18, n=301) em meio de maturaçäo TCM+HEPES, em banho-maria a 39ºC, com os mesmos componentes utilizados para o Grupo Controle, porém com apenas 1mM de bicarbonato. Decorrido cada período de transporte, os mesmos foram transferidos para placas com meio de maturaçäo, completando o período de 24h em estufa, nas mesmas condiçöes do Grupo Controle. O período de fecundaçäo foi de 18h em condiçöes semelhantes de temperatura e atmosfera gasosa, em FERT-TALP acrescido de heparina, sendo a dose inseminante de 1x106 espermatozóides/mL, selecionados por migraçäo ascendente. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOF + 5 por cento SVE por 8 dias, em estufa a 39ºC, em bolsas gaseificadas com 5 por cento CO2, 5 por cento O2 e 90 por cento N2. Na avaliaçäo da clivagem, näo houve diferença entre os tratamentos. As taxas de desenvolvimento embrionário no dia 7 foram semelhantes para os grupos Controle (20,9 por cento), T6 (19,2 por cento) e T12 (21,4 por cento), com uma reduçäo (P<0,05) observada no grupo T18 (12,3 por cento), em relaçäo aos grupos Controle e T12. No dia 9, o T18 apresentou uma menor (P<0,05) produçäo de blastocistos expandidos mais eclodidos, em relaçäo aos demais grupos, embora näo tenha sido observada diferença (P>0,05) na taxa de eclosäo. O número médio de células dos blastocistos eclodidos näo diferiu (P>0,05) entre os grupos Controle (136), T6 (125,5) e T12 (126,8). Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos em meio de maturaçäo TCM+HEPES, sem controle da atmosfera gasosa, a 39ºC, pelo período de até 12h. Esta técnica oferece uma alternativa prática e eficiente para o transporte dos oócitos bovinos destinados à produçäo in vitro de embriöes bovinos (PIV).

Desenvolvimento embrionário de oócitos bovinos mantidos em fluido folicular bovino de folículos de diferentes diâmetros / Embryo development of bovine oocytes held in follicular fluid from bovine follicles of different diameters

Oócitos bovinos têm sido mantidos em fluido folicular como meio para transporte e para aumento de sua competência, antes da maturação. Oitocentos e oitenta e um (881) oócitos foram aspirados de folículos de 2 a 8mm, de ovários de abatedouro, para avaliar o efeito da manutenção de oócitos bovinos em fluido folicular bovino de folículos de diferentes tamanhos sobre o desenvolvimento embrionário. Os oócitos foram distribuídos aleatoriamente em quatro tratamentos, com sete repetições cada. No grupo controle (n=217), os oócitos foram maturados por 24h em TCM-199 com Soro de Égua em Estro (SEE), piruvato e rFSH-h, em estufa a 39ºC, com 5,00 por cento de CO2 e umidade saturada. No tratamento FFpequeno (n=216), os oócitos foram mantidos por 6h em fluido folicular de folículos de 3 a 5mm a 30ºC e posteriormente maturados por 18h nas mesmas condições do grupo controle. Os oócitos dos tratamentos FFmédio (n=226) e FFgrande (n=222) foram mantidos em fluido folicular de folículos com 5,1 a 8mm e folículos maiores de 8,1mm, respectivamente e, após, maturados por 18h. Após a fecundação por 18h, os zigotos foram cultivados por 8 dias em SOFaaci com 5,00 por cento de SEE, em estufa a 39ºC, em bolsas gaseificadas com 5,00 por centoCO2, 5,00 por centoO2 e 90,00 por centoN2. Oócitos do grupo FFpequeno resultaram em menor (P<0,05) taxa de blastocistos em D7 que os grupos Controle e FFgrande. No D9, as taxas de blastocistos e de eclosão não diferiram (P>0,05) entre os grupos. O fluido folicular de folículos médios e grandes pode ser utilizado para o manutenção de oócitos bovinos por 6h a 30ºC, antes da maturação por 18h.

Produção in vitro de embriões bovinos em tubos sem controle da atmosfera gasosa / In vitro production of bovine embryo in tubes without gaseous atmosphere control

Com a maior utilização da OPU existe a necessidade de encontrar alternativas para iniciar as primeiras fases da PIV sem controle da atmosfera. O desenvolvimento de um método prático e simples de transporte/maturação/fecundação permitiria maior eficiência do laboratório e diminuição dos custos de produção. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método de maturação e fecundação para complexos cumulus oócitos (CCO) em tubos de polipropileno sem gaseificação, mantidos em banho-maria. A maturação in vitro em estufa foi conduzida em TCM-199 modificado (controle) enquanto que para os tratamentos em banho-maria, em tubos, o meio foi acrescido de 25mM de N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-ácido etanosulfônico (HEPES). Na fecundação in vitro dos oócitos em tubos, os CCO foram mantidos em banho-maria a 39ºC em Talp-Fert, acrescido de HEPES em concentrações entre 10mM a 28,7 mM por 10 a 18 horas, sob óleo mineral. O cultivo realizou-se em placas em bolsas gaseificadas com meio SOFaaci com soro de vaca em estro (SVE), sob óleo mineral, em estufa com 5,00 por centoCO2 , 5,00 por centoO2 e 90,00 por cento de N2 a 39ºC, por 9 dias. Verificou-se que CCO maturados por 24h em tubos não gaseificados, mantidos em banho-maria também podem ser fecundados em meio Talp-Fert com 25 mM de HEPES, em tubos não gaseificados, mantidos em banho-maria durante 10 horas. As taxas de clivagem, blastocistos em D7 e D9 em tubos não gaseificados foram semelhantes (P>0,05) aos procedimentos em estufa. A fecundação em Talp-Fert com 10 mM a 28,7 mM de HEPES em tubos mantidos em banho-maria prejudica o desenvolvimento embrionário quando conduzida por 18 horas.

Desenvolvimento embrionário in vitro de oócitos bovinos mantidos em líquido folicular ou TCM-hepes / In vitro embryo development from bovine oocytes maintained in follicular fluid or TCM-hepes

Complexos Cumulus-Oócito (CCO) bovinos foram divididos em 4 grupos para avaliar o seu comportamento durante a manutenção em LFb e maturação in vitro (MIV) em TCM-199 com ou sem Hepes. CCO MIV por 24h em TCM-199 em estufa a 39ºC com 5,00 por cento de CO2 (Controle) tiveram o seu desenvolvimento comparado ao de CCO MIV em tubos repletos de TCM-HEPES (5,95 mg/mL), em banho-maria (BM) a 39ºC por 24h (Grupo 1 - BM24h), ao de CCO mantidos em líquido folicular bovino (LFb), por 6h a 30ºC seguido de maturação por 18h nas mesmas condições que o grupo Controle (Grupo 2 - LFb6C18h) e ao de CCO mantidos em LFb seguido da maturação por 18h sob as mesmas condições que o grupo 1 (Grupo 3 - LFb6BM18h). A fecundação foi realizada em FERT-TALP por 18h. Os zigotos foram cultivados em SOFaaci, sob óleo mineral, em bolsas plásticas gaseificadas. A taxa de clivagem no Grupo Controle foi superior a do Grupo 3 (P<0,05), mas não houve diferença no percentual de blastocistos no D7 e D9 e no de blastocistos eclodidos entre os 4 grupos. Portanto, oócitos podem ser mantidos por 6h em LFb, a 30ºC, antes da maturação em TCM-HEPES por 18h ou ser maturados por 24h, em TCM-HEPES, em banho-maria a 39ºC, sem atmosfera gasosa controlada. A simplificação da MIV aqui introduzida através do preenchimento de tubos de 1,0mL com TCM-HEPES e manutenção em banho-maria a 39ºC, poderá ser uma opção viável e prática para os programas de OPU/PIV em bovinos.

Vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro e expostos à citocalasina B / Vitrification of oocytes and in vitro produced bovine embryos exposed to cytochalasin B

Foi avaliada a influência da citocalasina B na vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. No Experimento I, 956 oócitos foram maturados por 22h, sendo imediatamente vitrificados (tratamento Vitri) ou expostos por 15 a 20 minutos, à solução com 7,5µg/mL (tratamento CB7,5Vitri) ou 45µg/mL (tratamento CB45Vitri) de citocalasina B, antes da vitrificação. Após 30 segundos de exposição à SV1 [400µl TCM-Hepes com 10 (por cento) soro fetal (SF), 50µl etilenoglicol (EG) e 50µl DMSO], e 20 segundos à SV2 (300µl trealose 1,0M + 20 (por cento) SF, 100µl EG e 100µl DMSO), os oócitos foram vitrificados em palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi realizado a 37-38ºC em duas etapas de 5 minutos cada, em trealose 0,3M e 0,15M. Não houve diferenças (P>0,05) nos percentuais de clivagem e desenvolvimento embrionário entre os tratamentos Vitri, Cito7,5Vitri e Cito45Vitri, os quais foram inferiores (P<0,05) ao controle. No Experimento II, 269 blastocistos expandidos foram distribuídos em 3 tratamentos. No tratamento Vitri, os embriões foram expostos por 1 minuto à SV1 e 20 segundos à SV2, a qual foi modificada pela substituição da trealose por TCM-Hepes. No tratamento CB45Vitri, a vitrificação ocorreu após exposição de 10 minutos à solução com 45µg/mL de citocalasina B. Não foram observadas diferenças (P>0,05) no percentual de re-expansão e eclosão entre os grupos Vitri e CB45Vitri, os quais foram inferiores (P<0,05) ao grupo controle. Os resultados indicam que, independentemente da dose utilizada, a exposição a citocalasina B não produz efeito benéfico na vitrificação de oócitos ou blastocistos bovinos produzidos in vitro

Cultivo individual de blastocistos bovinos produzidos in vitro / Individual culture of in vitro produced bovine blastocysts

Embriöes bovinos produzidos in vitro foram cultivados individualmente do D7 ao D9, com o intuito de avaliar o seu desenvolvimento posterior. Quarenta e nove embriöes, nos estágios de blastocisto inicial, blastocisto e blastocisto expandido foram cultivados, individualmente, em 50ml de meio SOF + 5 por cento SVE, do D7 ao D9 (D0=fecundaçäo). Entre o D7 e D8, os blastocistos foram cultivados em palhetas (TcP) ou em placas (CP) e, entre o D8 e D9, foram cultivados apenas em placas. O índice de blastocistos que avançaram pelo menos um estágio de desenvolvimento, entre D7 e D8, foi de 71 por cento, 37 por cento e 44 por cento no CP e de 100 por cento, 66 por cento e 36 por cento no TcP, respectivamente para blastocistos iniciais, blastocistos e blastocistos expandidos. O percentual total de embriöes que evoluíram do D7 para D8 foi de 50 por cento (12/24) para o CP e de 60 por cento (15/25) para o TcP, os quais näo foram significativamente diferentes (P>0,05). Na avaliaçäo efetuada no D9, näo foram constatadas diferenças (P>0,05) no percentual de blastocistos eclodidos, entre os dois sistemas de cultivo (29 por cento e 24 por cento para CP e TcP, respectivamente). Após coloraçäo fluorescente dos núcleos, näo foi observada diferença (P>0,05) entre o número médio de células dos blastocistos eclodidos (182,66 vs. 202,8) e expandidos (94,5 vs. 88), para o CP e TcP, respectivamente. Blastocistos bovinos produzidos in vitro podem ser cultivados individualmente do D7 ao D9, näo havendo efeito do sistema de cultivo empregado (placas ou palhetas) sobre a taxa de eclosäo e o número de células

Abordagem laparoscópica na égua como meio auxiliar nas técnicas de reproduçäo assistida / Laparoscopic approach of the mare as an aid in reproductive assisted technology

A laparoscopia é uma ferramenta pouco explorada nas técnicas assistidas da reproduçäo em eqüinos, ao contrário do que já ocorre com o homem, animais de zoológicos e domésticos. Este estudo objetivou verificar a possibilidade de oferecer bases para a canulaçäo do oviduto e sua futura aplicaçäo em programas de transferência de gametas e embriöes nesta espécie. Foram realizadas 17 laparoscopias em 10 éguas mantidas em estaçäo onde cada ovário foi abordado pelo flanco ipsolateral. Após identificaçäo da tuba uterina, o infundibulum foi gentilmente tracionado e um cateter avançado em direçäo ao óstio abdominal da tuba uterina para a ampola, onde foram depositados 250 æl de meio de cultivo (Dulbecco's - PBS). A utilizaçäo da técnica laparoscópica em reproduçäo assistida na égua pode ser considerada pioneira e tem o potencial de diminuir os custos de manutençäo de receptoras através do aproveitamento de ciclos repetidos, o que näo é possível pela abordagem convencional através de laparotomia. Este custo é um dos principais entraves à aplicaçäo comercial das técnicas assistidas da reproduçäo em eqüinos